Medindo a hemólise no soro bovino por UV direto

Scientific Reports volume 12, Número do artigo: 13523 (2022) Citar este artigo

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Um procedimento simples e rápido é necessário para a detecção e quantificação de rotina da hemólise, uma das principais fontes de resultados não confiáveis ​​na análise de soro. Neste estudo, comparamos duas abordagens diferentes para a determinação rápida da hemólise no soro bovino. A primeira consistiu em estimar a hemólise por meio de uma simples medição espectrofotométrica ultravioleta-visível direta (UV-VIS) de amostras de soro. A segunda envolveu a análise de dados de cores vermelho, verde, azul (RGB) extraídos de imagens digitais de amostras de soro e relacionando o conteúdo de hemoglobina (Hb) por meio de calibrações univariadas (R, G, B e intensidade separadamente) e multivariadas (R , G, B e intensidade em conjunto) usando regressão de mínimos quadrados parciais e redes neurais artificiais. A análise UV-VIS direta e a análise RGB-multivariada usando métodos de rede neural foram apropriadas para avaliar a hemólise em amostras de soro de bovinos. Os procedimentos apresentaram boa acurácia (recuperações médias de 100,7 e 102,1%, respectivamente), precisão adequada (com coeficientes de variação de 0,21 a 2,68%), limite de detecção (0,14 e 0,21 g L–1, respectivamente) e linearidade de até a 10 g L-1.

A hemólise é o rompimento das membranas dos eritrócitos com a subsequente liberação do conteúdo celular no fluido circundante. Pode ocorrer devido ao manuseio inadequado da amostra ou a patologia. A hemólise geralmente ocorre in vitro devido à extração, transporte, preparação ou armazenamento incorretos da amostra. A hemólise in vivo é menos frequente e ocorre antes da coleta de sangue devido a condições patológicas como infecções, efeitos tóxicos, doenças imunomediadas, distúrbios hereditários dos glóbulos vermelhos, coagulação intravascular disseminada e fatores mecânicos e outros1. A hemólise in vivo pode ter sérias consequências para os pacientes e, portanto, os testes são realizados com o objetivo de distinguir entre hemólise in vivo e in vitro, pois qualquer suspeita de origem patológica deve ser investigada posteriormente.

Independentemente da origem, a hemólise é a principal causa de rejeição de amostras na patologia clínica humana2 e também é provável que seja um erro frequente na medicina veterinária3. A hemólise pode modificar os resultados analíticos pela liberação de componentes intracelulares no plasma, diluição da amostra ou produção de interferência espectrofotométrica ou química4. Os resultados das análises de sangue de rotina podem variar dependendo do grau de hemólise, da espécie animal envolvida e do método e instrumento utilizados na análise. Erros de cálculo devido à hemólise foram relatados para diversos analitos, como alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), g-glutamiltransferase (GGT), creatina quinase (CK), lactato desidrogenase (LDH), lipase, bilirrubina total, albumina, glicose, creatinina, uréia, cálcio, cobre, ferro, magnésio, molibdênio, selênio, zinco, potássio, sódio e cloreto5,6,7,8,9,10,11. A magnitude da diferença é altamente variável, pois para alguns analitos a relação com o grau de hemólise é linear, como com ferro, zinco, potássio e bilirrubina, enquanto, por exemplo, cálcio e cloreto mostram uma relação não linear, o que pode levar a medições significativas erros1,7. Além disso, a hemólise também pode interferir em imunoensaios e testes de coagulação12,13. O controle pré-analítico da hemólise é, portanto, uma boa prática.

A detecção visual é a maneira mais simples de determinar a hemólise em uma amostra, pois a cor varia dependendo do grau de hemólise. No entanto, vários estudos14,15 demonstraram que o exame visual é um meio não confiável de avaliar a hemólise e que essa prática pode afetar as decisões clínicas16. Assim, embora uma concentração de hemoglobina livre (Hb) ≥ 0,5 g L–1 seja considerada clinicamente significativa para os ensaios mais sensíveis à hemólise17, alguns pesquisadores consideram que a detecção visual confiável de concentrações inferiores a 2 g L–1 pode ser difícil18 por causa da variações individuais na cor do soro. Assim, a inspeção visual das amostras poderia produzir resultados enviesados, e alguns analitos como LDH e AST seriam afetados mesmo quando uma concentração de Hb no soro inferior a 0,5 g L–1 é detectada8. Por estas razões, a quantificação da hemólise é importante para evitar a rejeição desnecessária da amostra. Medições objetivas devem, portanto, ser usadas para determinar se as amostras devem ser rejeitadas ou aceitas com base no limite de aceitabilidade exigido para cada tipo de análise. Além disso, a avaliação da hemólise também pode ser útil para indicar a direção de qualquer viés nos parâmetros, embora o uso de fórmulas corretivas seja geralmente desencorajado2.